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RT-PCR實驗

簡要描述:RT-PCR實驗(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。

  • 更新時間:2022-12-23
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詳細介紹

RT—PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用,從RNA合成cDNA,再以cDNA為模板,在DNA聚合酶作用下擴增合成目的片段。RT—PCR技術靈敏而且用途廣泛,可用于檢測細胞中基因表達水平、細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉錄的RNA產物。無論使用何種RNA,關鍵是確保RNA中無RNA酶和基因組DNA的污染。用于反轉錄的引物可視實驗的具體情況選擇隨機引物、Oligo dT及基因特異性引物中的一種。對于短的不具有發(fā)夾結構的真核細胞mRNA,3種都可。

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